क्लस्टर्ड रेग्युलरली इंटरस्पेस्ड शॉर्ट पॅलिंड्रोमिक रिपीट्स (CRISPR) हे तिसऱ्या पिढीचे जीनोम संपादन तंत्रज्ञान आहे, ज्याने आपल्या उच्च-थ्रुपुट परिणामांमुळे जगात क्रांती घडवून आणली आहे. याचा उपयोग विविध जैविक रोग आणि संसर्गांवर उपचार करण्यासाठी केला जातो. विविध जीवाणू आणि इतर प्रोकॅरिओट्समध्ये (जसे की आर्किया) देखील फाजेसपासून बचाव करण्यासाठी CRISPR/Cas9 प्रणाली असते. असे नोंदवले गेले आहे की CRISPR/Cas9-आधारित धोरणे संभाव्यतः बदललेल्या प्रतिकार जनुकांवर, ट्रान्सक्रिप्शनवर आणि एपिजेनेटिक नियमनावर लक्ष्य साधून ट्रिपल निगेटिव्ह ब्रेस्ट कॅन्सरची (TNBC) वाढ आणि प्रगती रोखू शकतात. हे उपचारात्मक हस्तक्षेप TNBC मध्ये देखील दिसून येणाऱ्या औषध-प्रतिकारशक्तीसारख्या आव्हानात्मक समस्यांचे निराकरण करण्यास मदत करू शकतात. सध्या, CRISPR/Cas9 ला लक्ष्य पेशींपर्यंत पोहोचवण्यासाठी विविध पद्धती वापरल्या जातात, जसे की भौतिक (मायक्रोइंजेक्शन, इलेक्ट्रोपोरेशन आणि हायड्रोडायनामिक पद्धती), विषाणूजन्य (अॅडेनो-असोसिएटेड व्हायरस आणि लेंटिव्हायरस) आणि गैर-विषाणूजन्य (लायपोसोम्स आणि लिपिड नॅनोपार्टिकल्स). जरी TNBC च्या आण्विक कारणांचा अभ्यास करण्यासाठी विविध मॉडेल्स विकसित केले गेले असले तरी, शरीरांतर्गत (in vivo) जीनोम एडिटिंग साधने पोहोचवण्यासाठी संवेदनशील आणि लक्ष्यित पद्धतींच्या अभावामुळे त्यांच्या वैद्यकीय उपयोगावर मर्यादा येतात. थोडक्यात, हा आढावा उपलब्ध पुराव्यांच्या आधारे TNBC साठीच्या CRISPR/Cas9 उपचारांमधील प्रगती, आव्हाने, मर्यादा आणि शक्यता यांचे सर्वसमावेशक परीक्षण करतो. तसेच, कृत्रिम बुद्धिमत्ता आणि मशीन लर्निंग यांचे संयोजन TNBC च्या उपचारांमध्ये CRISPR/Cas9 धोरणांमध्ये कशी सुधारणा करू शकते, यावरही आम्ही प्रकाश टाकतो.
कर्करोगाचे वैशिष्ट्य म्हणजे अनियंत्रित पेशी विभाजन, पेशी चक्राच्या तपासणी बिंदूंमध्ये व्यत्यय आणि ट्यूमर सप्रेसर जीन्स (TSGs) मधील उत्परिवर्तन (मॅथ्यूज इत्यादी, २०२२). कर्करोगाच्या विविध प्रकारांपैकी, स्तनाचा कर्करोग हा महिलांमध्ये सर्वात सामान्य प्रकार आहे आणि जगभरात त्याचा मृत्युदर जास्त आहे (वॅक्स आणि वायनर, २०१९). स्तनाचा कर्करोग हा एक विषम रोग आहे, ज्यामध्ये ऊतीशास्त्रीय आणि जैविक वैशिष्ट्ये, क्लिनिकल सादरीकरण आणि वर्तन, आणि उपचारांना मिळणारा प्रतिसाद यांसारखी विविध वैशिष्ट्ये आहेत (वेगेल्ट इत्यादी, २०१०). स्तनाच्या कर्करोगाचे वर्गीकरण स्तनाच्या कर्करोगाचे निदान आणि ट्यूमरच्या रोगनिदानासाठी अचूक माहिती प्रदान करते. सामान्य बायोमार्कर्स आणि क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्यांचा वापर हा स्तनाच्या कर्करोगाच्या वर्गीकरणासाठी मुख्य निकष राहिला आहे (त्सांग आणि त्से, २०१९). स्तनाच्या कर्करोगाचे रोगनिदान आणि उपचारांना मिळणारा प्रतिसाद अनेक घटकांवर अवलंबून असतो, ज्यात इस्ट्रोजेन रिसेप्टर (ER), प्रोजेस्टेरॉन रिसेप्टर (PR), ह्युमन एपिडर्मल ग्रोथ फॅक्टर रिसेप्टर २ (HER2/neu) यांची उपस्थिती, आणि ऊतीशास्त्रीय ग्रेड, ट्यूमरचा प्रकार आणि ग्रेड यांचा समावेश आहे. आकार आणि लिम्फ नोड मेटास्टेसिस (अल-तुबैती, २०२०). स्तनाच्या कर्करोगाचे पाच आंतरिक आण्विक उपप्रकार ओळखले गेले आहेत, ज्यात ल्युमिनल ए, ल्युमिनल बी, HER2-एनरिच्ड, बेसल-लाइक आणि क्लॉडिन-लो यांचा समावेश आहे (प्रॅट इत्यादी, २०१५). TNBC हा कर्करोगाचा एक आण्विक उपप्रकार आहे जो सर्व ER, PR, आणि HER2 व्यक्त करत नाही (यिन इत्यादी, २०२०). ही पॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्ये TNBC शी संबंधित आहेत, जी स्तनाच्या कर्करोगाच्या इतर कोणत्याही प्रकारापेक्षा त्याची जलद वाढ आणि अधिक आक्रमक स्वरूपाची पुष्टी करतात (फेंग इत्यादी, २०१८). याव्यतिरिक्त, पेरू इत्यादी (२०००) यांनी स्तनाच्या कर्करोगाचे पुनर्वर्गीकरण करण्यासाठी आणि स्तनाच्या कर्करोगाचे पाच आंतरिक उपप्रकार ओळखण्यासाठी मायक्रोअरे तंत्रज्ञानाचा वापर केला (कॅडेनास, २०१२). बेसल-लाइक ब्रेस्ट कॅन्सर हा स्तनाच्या कर्करोगाचा एक उपप्रकार आहे ज्यामध्ये ट्रिपल-निगेटिव्ह फेनोटाइप असतो आणि तो जलद वाढीशी संबंधित आहे. हे लक्षात घेतले पाहिजे की सर्व बेसल-लाइक स्तनाच्या कर्करोगांचे सामान्यतः TNBC म्हणून चुकीचे निदान केले जाते, परंतु त्यापैकी केवळ ७७% TNBC असतात; याउलट, ७१-९१% TNBC हे बेसल-लाइक असतात, जे दर्शवते की स्तनाच्या कर्करोगाचे हे दोन प्रकार एकमेकांवर आच्छादित होतात आणि भिन्न वर्गीकरणे दर्शवतात (Wang D.-Y. et al., 2019). यामुळे रोगनिदान स्पष्ट करण्यासाठी आणि सध्याच्या व भविष्यातील उपचारांना मिळणारे संभाव्य प्रतिसाद ओळखण्यासाठी TNBC च्या विषमतेचे वैशिष्ट्यीकरण करण्याची गरज निर्माण होते. याव्यतिरिक्त, स्तनाच्या कर्करोगाच्या एकूण प्रकरणांपैकी १५-२०% प्रकरणे TNBC ची असतात आणि ५० वर्षांपेक्षा कमी वयाच्या महिलांमध्ये हे अधिक सामान्य आहे. सुमारे २०% TNBC प्रकरणांमध्ये BRCA1 किंवा BRCA2 उत्परिवर्तने नोंदवली गेली आहेत (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017, 2020). अभ्यासातून असेही दिसून आले आहे की TNBC मध्ये एक विशिष्ट रोगप्रतिकारक सूक्ष्मवातावरण असते, ज्यामध्ये व्हॅस्क्युलर एंडोथेलियल ग्रोथ फॅक्टर्स, ट्यूमर-असोसिएटेड मॅक्रोफेजेस (TAMs), ट्यूमर-इनफिल्ट्रेटिंग लिम्फोसाइट्स (TILs) आणि ट्यूमरच्या वाढीमध्ये व स्थलांतरामध्ये सामील असलेल्या इतर रेणूंचे उच्च प्रमाण असते. त्यामुळे, TNBC चे सूक्ष्मवातावरण समजून घेणे हे त्याच्या रोगनिदान आणि उपचारांसाठी महत्त्वपूर्ण आहे (फॅन आणि ही, २०२२).
TNBC चा रोगनिदान अंदाज घेण्यासाठी आणि प्रभावी उपचार सुनिश्चित करण्यासाठी, अचूक निदान महत्त्वाचे आहे. हे निदान प्रामुख्याने ER, PR आणि HER2 शोधण्यासाठी इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री (IHC) आणि स्तनातील अर्बुद शोधण्यासाठी मॅमोग्राफीवर आधारित असते. तथापि, मॅमोग्राफी अर्बुदांतर्गत वैशिष्ट्ये जसे की नेक्रोसिस आणि फायब्रोसिस पुरेशा प्रमाणात दर्शवू शकत नाही (दीपक सिंग इत्यादी, २०२१). खराब रोगनिदान आणि निदानामुळे डॉक्टर योग्य औषधे लिहून देऊ शकत नाहीत (चौधरी, २०२०), त्यामुळे TNBC असलेल्या रुग्णांची काळजी सुधारण्यासाठी विविध उपाययोजना वापरल्या जातात. सध्या, डॉक्सोरुबिसिन आणि सायक्लोफॉस्फामाइड ही दोन औषधे TNBC असलेल्या रुग्णांमध्ये वापरली जातात आणि त्यांनी चांगले परिणाम दाखवले आहेत. याव्यतिरिक्त, कार्बोटिन आणि सिस्प्लॅटिन यांसारखी इतर प्लॅटिनम औषधे देखील वापरली जातात (सिकोव्ह इत्यादी, २०१५). याव्यतिरिक्त, ओलापारिब, वेलापारिब आणि PF-01367338 सारखे PARP इनहिबिटर TNBC च्या उपचारासाठी संभाव्य केमोथेरपी औषधे म्हणून वापरले गेले आहेत (इशिनो एट अल., २०१८). Wnt/b-कॅटेनिन, NOTCH आणि हेजहॉग सिग्नलिंग पाथवे हे TNBC च्या उद्भव आणि प्रगतीमध्ये सामील असल्याचे नोंदवले गेले असल्याने, या पाथवेना लक्ष्य करणारी औषधे एक महत्त्वाची रणनीती असू शकते (आयसोला एट अल., २०१३). जरी आज शस्त्रक्रिया, रेडिएशन थेरपी आणि केमोथेरपी हे TNBC च्या उपचाराचे मुख्य आधार असले तरी, टार्गेटेड थेरपी, इम्युनोथेरपी, Cas9n, dCas9, CRISPR/Cas12, प्राइम एडिटिंग यांसारखी विविध CRISPR-संबंधित जीन एडिटिंग साधने आणि CRISPR/Cas9-टार्गेटेड जीन थेरपी यांसारखे नवीन उपचार विकसित करण्यात लक्षणीय प्रगती झाली आहे. येथे आपण TNBC च्या उपचारात वापरल्या जाणाऱ्या विविध CRISPR-संबंधित जीन एडिटिंग साधनांवर लक्ष केंद्रित करणार आहोत. त्यापैकी, CRISPR/Cas9 ने व्यापक लक्ष वेधले आहे.
Cas9n, ज्याला Cas9 निकेज असेही ओळखले जाते, हे CRISPR/Cas9 जीनोम संपादन प्रणालीमधून मिळवलेल्या Cas9 प्रथिनाचा एक जनुकीय अभियांत्रिकी प्रकार आहे (गुप्ता इत्यादी, २०१९). त्याच्या मूळ स्वरूपात, Cas9 प्रथिनामध्ये RuvC आणि HNH हे दोन न्यूक्लिएज डोमेन असतात, ज्यांचे मुख्य कार्य डीएनएच्या दोन्ही धाग्यांचे विभाजन करणे आहे. तथापि, Cas9n मध्ये, HNH या न्यूक्लिएज डोमेनपैकी एकात जनुकीय उत्परिवर्तन होते आणि तो निष्क्रिय होतो. त्यामुळे, Cas9n चा HNH डोमेन अकार्यक्षम राहतो. फक्त RuvC डोमेन सक्रिय राहतो, ज्यामुळे Cas9n डीएनएच्या एकेरी धाग्यांवर कापू शकतो किंवा खंड पाडू शकतो (ट्रेविनो आणि झांग, २०१४). Cas9 च्या तुलनेत, Cas9n ऑफ-टार्गेट परिणाम प्रभावीपणे कमी करू शकतो आणि पेशी दुरुस्ती यंत्रणा अचूकपणे सुधारू शकतो. Cas9n चा उपयोग दुहेरी-धाग्याच्या डीएनएमध्ये विशिष्ट ठिकाणी खंड पाडण्यासारख्या विविध समस्या सोडवण्यासाठी केला जाऊ शकतो. या उद्देशासाठी, दोन Cas9n रेणू एकत्र करून वापरण्यात आले (Yee, 2016). मिक्स्ड लिनिएज कायनेज 3 (MLK3) हे एक मायटोजेन-ॲक्टिव्हेटेड प्रोटीन कायनेज आहे जे TNBC मेटास्टेसिस दरम्यान मुख्य नियामक म्हणून काम करते (Cronan et al., 2012).
MLK3 अनेक सिग्नलिंग मार्गांना सक्रिय करू शकते ज्यामुळे TNBC मेटास्टेसिस होतो. उदाहरणार्थ, c-Jun N-टर्मिनल कायनेज (JNK) मार्ग पेशींची हालचाल आणि बाह्यपेशीय मॅट्रिक्सचे विघटन नियंत्रित करतो, आणि MLK3 JNK मार्गाला सक्रिय करते, ज्यामुळे पेशींची हालचाल वाढते आणि आक्रमक गुणधर्म प्राप्त होतात (Rattanasinchai and Gallo, 2016). MLK3 EMT चे नियमन देखील करते. हे करण्यासाठी, ते Snail, Slug आणि Twist सारख्या डाउनस्ट्रीम ट्रान्सक्रिप्शन घटकांना सक्रिय करते. हे घटक एपिथेलियल मार्करच्या अभिव्यक्तीला प्रतिबंधित करतात आणि मेसेनकायमल मार्करच्या अभिव्यक्तीला प्रोत्साहन देतात, ज्यामुळे मेटास्टॅटिक फेनोटाइप प्राप्त होतो (Casalino et al., 2023). MLK3 हे ECM च्या पुनर्रचनेत आणि मॅट्रिक्स मेटॅलोप्रोटीनेसेस (MMPs) सारख्या प्रोटीएसेसच्या सक्रियतेत भूमिका बजावते असे दिसून आले आहे, जे ECM चे विघटन करतात. यामुळे ट्यूमर पेशींचे आक्रमण आणि दूरच्या ठिकाणी प्रसार सुलभ होतो (Katari et al., 2019). अशाप्रकारे, मागील अभ्यासांनी दाखवले आहे की MLK3 TNBC मध्ये एक महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते. रत्नासिंचाई आणि गॅलो यांनी MLK3 च्या भूमिकेचा अभ्यास करण्यासाठी TNBC मॉडेल्सचा वापर केला आणि त्यांना आढळले की ते विशिष्ट सिग्नलिंग मार्गांद्वारे कर्करोगाच्या विकासास प्रोत्साहन देते. त्यांनी MLK3 संपादित करण्यासाठी CRISPR/Cas9n चा वापर केला आणि TNBC मेटास्टॅसिसमध्ये लक्षणीय घट पाहिली (रत्तनासिंचाई आणि गॅलो, २०१६).
dCas9, ज्याला अनेकदा निष्क्रिय Cas9 म्हटले जाते, हे Cas9 प्रथिनाचे एक सुधारित व्युत्पन्न रूप आहे. सक्रिय Cas9 च्या विपरीत, dCas9 मध्ये एंडोन्यूक्लिएज क्रिया नसते, ज्यामुळे ते डीएनए दुहेरी-सूत्र खंडित करण्यास असमर्थ ठरते. म्हणून, डीएनए अनुक्रमात कोणतेही बदल किंवा सुधारणा न करता जीनोमच्या विशिष्ट भागांना अचूकपणे लक्ष्य करण्यासाठी dCas9 चा वापर केला जाऊ शकतो (Wang et al., 2016). dCas9 मध्ये, RuvC आणि HNH ही दोन एंडोन्यूक्लिएज प्रथिने महत्त्वपूर्ण अमिनो आम्ल अवशेषांना दाबून निष्क्रिय केली जातात (Richter et al., 2016). डीएनए विखंडन क्रियेचा अभाव असूनही, dCas9 अनुवांशिक संशोधन आणि जैवतंत्रज्ञानामध्ये अनेक महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते. उदाहरणार्थ, ते जीनोमच्या विशिष्ट भागांचे दृश्यांकन करण्यास अनुमती देते, प्रतिलेखन नियमन सुलभ करते आणि एपिजेनेटिक बदलांना प्रोत्साहन देते (Brocken et al., 2018).
ट्रान्सक्रिप्शन फॅक्टर ZEB1 (झिंक फिंगर ई-बॉक्स बाइंडिंग होमियोबॉक्स 1) एपिथेलियल-मेसेन्कायमल ट्रान्झिशन (EMT) घडवून आणण्यात एक विशिष्ट आणि महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावतो. ही एक पेशीय प्रक्रिया आहे जी गर्भाच्या विकासादरम्यान, ऊतींच्या दुरुस्तीत आणि कर्करोगाच्या प्रगतीत घडते. यामध्ये एपिथेलियल पेशींचे मेसेन्कायमल पेशींमध्ये रूपांतर होते, ज्यामुळे पेशींचे स्वरूप, गतिशीलता, आक्रमकता इत्यादींमध्ये बदल होतात (वू एट अल., २०२०). ZEB1 अनेक एपिथेलियल मार्कर्सना प्रतिबंधित करतो, जसे की ई-कॅडहेरिन आणि ऑक्लुडिन, जे TNBC मध्ये पेशी-पेशींमधील आसंजन आणि एपिथेलियल पेशींची ध्रुवीयता टिकवून ठेवण्यासाठी जबाबदार असतात (मोरेनो-ब्यूनो एट अल., २००८). याव्यतिरिक्त, ZEB1 काही मार्कर्सना सक्रिय करतो जसे की एन-कॅडहेरिन, व्हिमेंटिन आणि फायब्रोनेक्टिन (कोनराडी एट अल., २०१४) आणि सायटोस्केलेटल रिमॉडेलिंगमध्ये सामील असलेल्या जनुकांचे नियमन देखील करतो, जसे की Rho GTPases आणि मॅट्रिक्स मेटॅलोप्रोटीनेसेस (MMPs) (हुआंग). एट अल., २०१४). २०२२), याव्यतिरिक्त, ते ट्रान्सफॉर्मिंग ग्रोथ फॅक्टर-बीटा (TGF-β), Wnt सिग्नलिंग इत्यादी विविध सिग्नलिंग मार्गांवर देखील परिणाम करते, ज्यामुळे TNBC मध्ये ट्यूमर आक्रमण आणि मेटास्टेसिसला प्रोत्साहन मिळते (चेन एट अल., २०१६). ). असंख्य अभ्यास आणि वैज्ञानिक पुरावे सूचित करतात की ZEB1 मध्ये TNBC च्या निदानासाठी आणि उपचारात्मक हस्तक्षेपासाठी एक मौल्यवान घटक म्हणून मोठी क्षमता आहे. अलीकडील एका अभ्यासात, वरियाह एट अल. यांनी TNBC मॉडेलचा वापर केला आणि dCas9 द्वारे ZEB1 चे संपूर्ण दमन साध्य केले. अशाप्रकारे, त्यांनी इन विवो परिस्थितीत ZEB1 ची अत्यंत उच्च विशिष्टता आणि जवळजवळ संपूर्ण प्रतिबंध पाहिला (वरियाह एट अल., २०२३).
CRISPR/Cas12 हे CRISPR/Cpf1 नावाचे एक जनुकीय संपादन साधन आहे. हे CRISPR/Cas प्रणालीपासून विकसित झाले आहे, जिथे Cas12 ही संज्ञा CRISPR-संबंधित प्रथिन १२ (CRISPR-associated protein 12) दर्शवते (भरतकुमार इत्यादी, २०२२), जे Cas9 शी पूर्णपणे मिळतेजुळते आहे. फरक फक्त एवढाच आहे की, त्यात Cas12 प्रथिन असते. Cas9 च्या तुलनेत, Cas12 मध्ये काही अद्वितीय कार्ये आहेत, जसे की जनुकीय संपादन प्रक्रियेदरम्यान चिकट टोके (sticky ends) तयार करणे, तर Cas9 बोथट टोके (blunt ends) तयार करते (वांग इत्यादी, २०२१). Cas12 चा हा गुणधर्म त्याच्या विशिष्ट डीएनए हाताळणी तंत्रज्ञानाला हातभार लावतो. लक्ष्य डीएनएला अचूकपणे ओळखण्यास आणि कापण्यास सक्षम असलेले प्रथिन म्हणून, त्यात विलक्षण बहुउपयोगिता आहे, ज्यामुळे ते जनुकीय संपादनासह विविध अनुप्रयोगांसाठी एक प्रभावी साधन बनते (पिकार-ऑलिव्हर आणि गर्स्बॅक, २०१९).
इतर CRISPR प्रकारांप्रमाणेच, CRISPR/Cas12 देखील TNBC मधील जनुके निष्क्रिय करण्यास किंवा सक्रिय करण्यास सक्षम आहे, जे त्याच्या रोगजननात किंवा उपचारांना मिळणाऱ्या प्रतिसादात महत्त्वाची भूमिका बजावणाऱ्या जनुकांना लक्ष्य करते (यांग आणि झांग, २०२३). ही प्रक्रिया पूर्ण करण्यासाठी, एक मार्गदर्शक RNA (gRNA) विकसित करण्यात आला, जो Cas12 ला लक्ष्य जनुकाकडे निर्देशित करतो. एकदा Cas12 त्याच्या लक्ष्याशी जोडला गेला की, तो DNA मध्ये दुहेरी-सूत्र खंडन (double-strand breaks) घडवून आणतो आणि DNA दुरुस्ती यंत्रणा सक्रिय करतो. दुरुस्ती प्रक्रियेदरम्यान, चुकीचे न्यूक्लिओटाइड्स समाविष्ट होऊ शकतात, ज्यामुळे जनुकीय उत्परिवर्तन (gene mutations) आणि कार्यक्षमता कमी होणे (loss of function) होऊ शकते (झांग इत्यादी, २०२१अ). याव्यतिरिक्त, जनुके सक्रिय करण्यासाठी Cas12 एन्झाइमची एक सुधारित आवृत्ती (ज्याला dCas12 म्हणतात) देखील वापरली गेली. याला ट्रान्सक्रिप्शन ॲक्टिव्हेटरसोबत एकत्र करून, विशिष्ट जनुकांना प्रेरित करणे आणि त्याद्वारे त्यांना सक्रिय करणे शक्य होते. या तंत्रज्ञानामध्ये ट्यूमर सप्रेसर जनुकांच्या सक्रियतेला प्रोत्साहन देण्याची प्रचंड क्षमता आहे (सुलतान इत्यादी, २०२२).
प्राइम एडिटिंग हे नव्याने विकसित झालेले आणि अत्यंत श्रेष्ठ असे जीनोम एडिटिंग तंत्रज्ञान आहे. ते एखाद्या सजीवाच्या डीएनए मध्ये अत्यंत अचूकपणे बदल करण्यास सक्षम आहे (चेन आणि लिऊ, २०२३). प्राइम एडिटिंग हे दोन मुख्य घटकांच्या एकत्रीकरणाद्वारे साध्य केले जाते: एक सुधारित CRISPR/Cas9 एन्झाइम आणि रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज. CRISPR/Cas9 एन्झाइमची भूमिका जीनोममधील अचूक जागांना निवडकपणे लक्ष्य करणे ही आहे, तर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज लक्ष्यित ठिकाणी डीएनए मध्ये पूर्णपणे बदल करण्यास मदत करते (हसन इत्यादी, २०२१). प्राइम एडिटिंगच्या यंत्रणेमध्ये, पहिल्या टप्प्यात प्राइम एडिटिंग गाइड आरएनए (pegRNA) तयार केला जातो (स्टँडेज-बेअर इत्यादी, २०२१). त्यात लक्ष्यित डीएनए मधील इच्छित एडिटिंग साइटशी संबंधित लक्ष्यित अनुक्रम आणि आरएनए टेम्पलेट असतो. त्यानंतर, pegRNA ला प्राइम एडिटिंग न्यूक्लिएज (PE2) सोबत लक्ष्यित पेशींमध्ये टाकले जाते. PE2 हे एक फ्यूजन प्रोटीन आहे, जे Cas9 एन्झाइम, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज आणि प्राइम एडिटिंग अडॅप्टरपासून बनलेले असते (मार्टिन-अलोन्सो इत्यादी, २०२१). पेशीच्या आत, पेगआरएनए (pegRNA) आणि पीई२ (PE2) कॉम्प्लेक्स ज्या विशिष्ट डीएनएमध्ये बदल करू इच्छितात त्याचा शोध घेतात. कॅस९ (Cas9) एन्झाइम डीएनए कापते आणि एकेरी धाग्यांचा (single strands) बनलेला एक टेम्पलेट तयार करते (चोई इत्यादी, २०२२). रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज (Reverse transcriptase) या टेम्पलेटचा वापर करून डीएनएला संपादनासाठी (editing) तयार करते. डीएनएची प्रत बनवण्यासोबतच, आरएनए टेम्पलेट संपादित करण्याच्या सूचनांचाही त्यात समावेश असतो. शेवटी, नव्याने तयार झालेला डीएनए धागा डीएनएमधील तुटलेला भाग दुरुस्त करण्यासाठी टेम्पलेट म्हणून वापरला जातो, ज्यामुळे इच्छित बदल असलेला एक बदललेला डीएनए क्रम (sequence) तयार होतो (ओचोआ-सांचेझ इत्यादी, २०२१). प्रायमर संपादन यंत्रणा जनुकांमध्ये व्यापक उत्परिवर्तनांना (mutations) कारणीभूत ठरू शकते. ती बिंदू उत्परिवर्तने (point mutations), अंतर्वेशने (insertions), विलोपने (deletions) आणि अगदी जनुकीय प्रतिस्थापनांना (gene replacements) लक्ष्य करू शकते (अन्झालोन इत्यादी, २०१९; चेन आणि लिऊ, २०२३). प्रायमर संपादनामुळे पूर्वीच्या जीनोम संपादन तंत्रज्ञानापेक्षा अनेक फायदे मिळतात. यामध्ये वाढलेली अचूकता, कमी झालेले ऑफ-टार्गेट परिणाम आणि डीएनएच्या दुहेरी धाग्यांच्या तुटण्यावर अवलंबून न राहता डीएनए संपादित करण्याची क्षमता यांचा समावेश आहे (अन्झालोन इत्यादी, २०२०).
CRISPR/Cas9 तंत्रज्ञान मूळतः जीवाणूंना प्लास्मिड हस्तांतरण आणि फेज संसर्गापासून वाचवण्यासाठी विकसित केले गेले होते आणि नंतर जीनोम संपादनासाठी एक प्रभावी RNA-आधारित DNA लक्ष्यीकरण साधन म्हणून त्याचा पुनर्वापर करण्यात आला (जियांग आणि डौडना, २०१७). याव्यतिरिक्त, CRISPR/Cas9 प्रणाली अनुक्रमे जीवाणू आणि आर्कियल जीनोममध्ये ५०% आणि ८७% प्रमाणात असल्याचे नोंदवले गेले आहे (इशिनो इत्यादी, २०१८). CRISPR/Cas9 हे इन व्हिवो आणि इन व्हिट्रो पद्धती वापरून कोणत्याही असामान्य जनुकीय अनुक्रमाचे विलोपन, अंतर्वेशन आणि दुरुस्ती करण्यासाठी एक संभाव्य साधन आहे (साबिट इत्यादी, २०२१). शिवाय, CRISPR/Cas9 हे त्याच्या विशिष्ट लक्ष्य जनुकांसाठी असलेल्या विशिष्टतेमुळे अनुकूलित रोगप्रतिकार प्रणालीचा एक भाग असल्याचे दिसून आले आहे (चेन आणि झांग, २०१८).
CRISPR/Cas9 मध्ये Cas9 आणि एकल मार्गदर्शक RNA (sgRNA) यांचा समावेश असतो. Cas9 हे अनेक प्रथिन घटकांनी बनलेले एक एंडोन्यूक्लिएज आहे. याव्यतिरिक्त, Cas9 मध्ये अद्वितीय संरचनात्मक आणि आकारिक गुणधर्म आहेत (Pacesa et al., 2022), कारण त्यात दोन लोब असतात: ओळख (REC) आणि न्यूक्लिएज (NUC). REC लोब पुढे तीन भागांमध्ये विभागलेला आहे: REC1, REC2, आणि ब्रिज हेलिक्स (Cromwell et al., 2018). NUC मध्ये तीन लोब असतात, म्हणजेच RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH आणि प्रोटोस्पेसर्स संलग्न मोटिफ (PAM) इंटरॅक्शन डोमेन (आकृती १) (Song et al., 2016). sgRNA मध्ये दोन घटक असतात, ज्यात CRISPR RNA (crRNA) आणि ट्रान्सकोडिंग स्मॉल RNA (ट्रेसर RNA) यांचा समावेश होतो (आकृती १). एसजीआरएनए (sgRNA) हे कॅस९ (Cas9) प्रोटीनला कनेक्सिन्सशी (connexins) जोडून एक सक्रिय कॉम्प्लेक्स तयार करते, ज्याला इफेक्टर कॉम्प्लेक्स (effector complex) असेही म्हणतात (Richter et al., 2012). सीआरआरएनए (crRNA) ही १८-२० न्यूक्लिओटाइडची एक बेस पेअर आहे, जी लक्ष्य डीएनए अनुक्रमांना (target DNA sequences) ओळखण्यात महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते. याव्यतिरिक्त, सीआरआरएनए लक्ष्य डीएनएशी जोडी बनवते, आणि ट्रॅकआरआरएनए (tracrRNA) हे कॅस९ न्यूक्लिएजला (Cas9 nuclease) लक्ष्य डीएनएला बांधण्यासाठी एक आधार म्हणून काम करते (Manghwar et al., 2019). दुसरीकडे, पीएएम (PAM) अनुक्रमात ३ न्यूक्लिओटाइड्स असतात, जे इफेक्टर कॉम्प्लेक्सच्या डीएनएशी होणाऱ्या बंधनाची पुष्टी करतात, ते निर्दिष्ट करतात आणि त्यात मध्यस्थी करतात. कॅस९ प्रोटीन कॉम्प्लेक्सचे उपघटक (subunits) रुव्हसी (RuvC) आणि एचएनएच (HNH) मध्ये उत्प्रेरक क्रियाशीलता (catalytic activity) असते (Richter et al., 2012; Asmamaw and Zawdie, 2021). कॅस९ उपघटकाचा एचएनएच न्यूक्लिएज डोमेन (HNH nuclease domain) सीआरआरएनएशी संबंधित डीएनए स्ट्रँडचे (DNA strand) विभाजन करतो. RuvC न्यूक्लिएज डोमेन इतर डीएनए स्ट्रँड्सचे विभाजन करतो आणि डबल-स्ट्रँड ब्रेक (DSBs) तयार करतो, त्यानंतर दोन वेगवेगळ्या डीएनए ब्रेक दुरुस्ती यंत्रणा सक्रिय होतात (Jiang and Doudna, 2017) (आकृती 1).
आकृती १. CRISPR/Cas9 चे विहंगावलोकन (A). CRISPR/Cas9 प्रणालीचे घटक: (i). Cas9 एंडोन्यूक्लिएज लक्ष्य डीएनए क्रम कापण्यासाठी जबाबदार आहे, (ii) crRNA आणि tra-crRNA कायमेराच्या संयोगातून तयार झालेले एकल मार्गदर्शक (sg) RNA. (दोन). Cas9 मध्ये Rec I, Rec II, NUC लोब (HNH आणि Ruv C हे उपघटक आहेत) आणि PAM इंटरॅक्शन डोमेन (C) यांसारखे अनेक घटक त्यांच्या संबंधित कार्यांसह समाविष्ट आहेत. CRISPR/Cas9 प्रथिन संकुल डीएनए क्रमांना अपूरक आणि पूरक स्वरूपात विभाजित करते (D). CRISPR/Cas9 तीन टप्प्यांमध्ये जीनोमचे संपादन करते: ओळखणे, कापणे आणि दुरुस्ती करणे. डिझाइन केलेले sg-RNA, Cas9 ला मार्गदर्शन करते आणि पूरक घटक crRNA द्वारे इच्छित क्रम ओळखते. Cas9 5′-NGG-3′ येथील PAM अनुक्रमाला ओळखते आणि DNA वितळवते, ज्यामुळे DNA-RNA संकरित रचना तयार होते आणि विच्छेदन प्रक्रिया सुरू होते. Cas9 चा HNH डोमेन पूरक स्ट्रँडचे (complementary strand) विच्छेदन करतो, आणि RuvC डोमेन अपूरक स्ट्रँडचे (non-complementary strand) विच्छेदन करतो. CRISPR/Cas9 दुहेरी-पदरी DNA (dsDNA) दोन प्रकारे तोडून त्याची दुरुस्ती करते: नॉन-होमोलॉगस एंड जॉइनिंग (NHEJ) आणि होमोलॉजी-डायरेक्टेड रिपेअर (HDR). NHEJ बाह्य होमोलॉगस DNA च्या अनुपस्थितीत एका एन्झायमॅटिक प्रक्रियेद्वारे दुहेरी-पदरी DNA ची दुरुस्ती करते; ही एक त्रुटी-प्रवण यंत्रणा आहे जी यादृच्छिक DNA अनुक्रम समाविष्ट करू शकते किंवा काढू शकते. HDR अत्यंत विशिष्ट असते आणि त्यासाठी होमोलॉगस DNA टेम्पलेट्सची आवश्यकता असते.
CRISPR/Cas9-मध्यस्थ दुरुस्ती मार्गांमध्ये नॉन-होमोलॉगस एंड जॉइनिंग (NHEJ) आणि होमोलॉजी-डायरेक्टेड रिपेअर (HDR) यंत्रणांचा समावेश होतो. NHEJ हा एक त्रुटी-प्रवण मार्ग आहे कारण त्यात अंतर्वेशन किंवा विलोपन होते आणि दुरुस्ती यंत्रणेदरम्यान कोणत्याही विशिष्ट रचनेची आवश्यकता नसते. मानक प्रथिने तयार करण्यासाठी यात यादृच्छिक न्यूक्लिओटाइड्सचा वापर केला जातो (अब्बासी इत्यादी, २०२१). या दुरुस्ती प्रणालीमध्ये KU कॉम्प्लेक्स, क्रॉस-कॉम्प्लिमेंटिंग प्रोटीन कॉम्प्लेक्स प्रकार ४ (XRCC-4), डीएनए एंड प्रोसेसिंग एन्झाइम आणि प्रोटीन कायनेज DNA-PKcs यांसारख्या चार कॉम्प्लेक्सचा समावेश असतो (अब्बासी इत्यादी, २०२१). KU कॉम्प्लेक्स प्रथिनामध्ये Ku 70 आणि Ku 80 असे दोन उपघटक असतात आणि ते NHEJ यंत्रणेत महत्त्वाची भूमिका बजावते, कारण ही दुरुस्ती यंत्रणा लक्ष्य DNA च्या बोथट किंवा जवळजवळ बोथट टोकांना दोन उपघटकांच्या (Ku 70 आणि Ku 80) बंधनाने सुरू होते (अब्बासी इत्यादी, २०२१), जे इजा झालेल्या ठिकाणी इतर NHEJ-संबंधित घटकांना आणण्यासाठी आधार म्हणून काम करते (यांग इत्यादी, २०२०). XRCC-4 आणि DNA लायगेज अनुक्रमे ३३४ आणि ९११ अमिनो आम्लांनी बनलेले असतात आणि XRCC4-DNA लायगेज IV कॉम्प्लेक्स DNA च्या टोकांच्या बंधनाला उत्तेजित करते (चॅटर्जी इत्यादी, २०१५). DNA एंड प्रोसेसिंग एन्झाइम, ज्याला पॉलिन्यूक्लिओटाइड कायनेज ३'-फॉस्फेट असेही म्हणतात, हे एक DNA एंड प्रोसेसिंग एन्झाइम आहे. ते DSB दुरुस्ती दरम्यान DNA मधील ३'P गट काढून टाकू शकते आणि ५'OH गटाचे फॉस्फोरिलेशन करू शकते. यामध्ये एसएसबी दुरुस्ती मार्गाचा वापर करून सिंगल-स्ट्रँड ब्रेक (एसएसबी) ची दुरुस्ती देखील समाविष्ट आहे (चॅटर्जी एट अल., २०१५). प्रोटीन कायनेज डीएनए-पीकेसीएस हे एक डीएनए-आधारित प्रोटीन कायनेज आहे ज्यामध्ये पीआयकेके (फॉस्फॅटिडिलिनोसिटॉल ३-कायनेज-संबंधित कायनेज) आणि अॅटॅक्सिया टेलॅन्जिएक्टेशिया म्युटेटेड (एटीएम) कुटुंबाचे उत्प्रेरक उपयुनिट, तसेच एटीएम आणि रॅड३-संबंधित एटीआर यांचा समावेश असतो. स्ट्रँड ब्रेक (डीएसबी) आणि सिंगल-स्ट्रँड ब्रेक (यू एट अल., २०२०; पेंग एट अल., २०१६).
HDR ही एक अधिक अचूक आणि योग्य दुरुस्ती यंत्रणा आहे, कारण यामध्ये समजात डीएनए द्विकाच्या (homologous DNA duplex) अखंड स्वरूपाचा वापर करून माहितीची नक्कल केली जाते, जरी यासाठी सिस्टर क्रोमॅटिड्सची (sister chromatids) उपस्थिती आवश्यक असते. हे सस्तन प्राण्यांच्या पेशीचक्राच्या S/G2 अवस्थेदरम्यान घडते. HDR मुख्यत्वे यीस्ट प्रजातींमध्ये आढळते, परंतु सस्तन प्राण्यांमध्ये NHEJ महत्त्वपूर्ण आहे (बर्मा इत्यादी, २००६; अब्बासी इत्यादी, २०२१). संपूर्ण दुरुस्ती यंत्रणा आकृती १ मध्ये दर्शविली आहे.
TNBC हा अनुवांशिक आणि एपिजेनेटिक विकृतींमुळे होत असल्याने, CRISPR/Cas9 वापरून घातक जीनोमिक/एपिजेनोमिक विकृती सुधारणे हा एक योग्य उपचारात्मक दृष्टिकोन असू शकतो (चेन एट अल., २०१९). याव्यतिरिक्त, पेशी-विशिष्ट ट्रान्सक्रिप्शनल नियमनामध्ये सामील असलेले काही ट्रान्सक्रिप्शन घटक कर्करोगाच्या पेशींची अद्वितीय वैशिष्ट्ये दर्शवू शकतात, जे सूचित करते की ट्रान्सक्रिप्शनल नियमन हे कर्करोगाच्या उपचारांसाठी एक उत्कृष्ट दृष्टिकोन असू शकतो (ड्रोस्ट एट अल., २०१७). ट्यूमरच्या या आण्विक वैशिष्ट्यांचा, जसे की अनुवांशिक, एपिजेनेटिक आणि ट्रान्सक्रिप्शनल दोष, औषध विकासासाठी उपयोग केल्याने क्लिनिकल परिणाम सुधारू शकतात आणि स्क्रीनिंगचा खर्च कमी होऊ शकतो. CRISPR हे एक संभाव्य जनुकीय संपादन साधन आहे जे केवळ कर्करोग-कारक जीनोमिक लक्ष्यांचा शोध आणि ओळखच करू शकत नाही, तर मानवी पेशींमधील ऑन्कोजीन्सचे संपादन, दमन आणि एपिजेनेटिक बदल करण्यासाठी देखील वापरले जाऊ शकते (तक्ता १) (अहमद एट अल., २०२१). ट्यूमर सप्रेसर्स, ऑन्कोजीन्स आणि औषध प्रतिरोधकतेशी संबंधित जनुके शोधण्यासाठी अनेक CRISPR स्क्रीन्स आयोजित केल्या गेल्या आहेत. विविध TNBC ऑन्कोजीन्समध्ये बदल करण्यासाठी CRISPR/Cas9 चा वापर आकृती २ मध्ये दाखवला आहे.
आकृती २. CRISPR/Cas9 वापरून विविध TNBC ऑन्कोजीन्सचे जनुकीय संपादन, ज्यामुळे ट्यूमरची वाढ आणि मेटास्टॅसिस कमी होते. या ऑन्कोजीन्समध्ये CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 आणि CXCR7, Crypto1, ROR1 आणि ST8SIA यांचा समावेश आहे, जे TNBC च्या निर्मिती आणि मेटास्टॅसिसमध्ये सहभागी असतात.
कर्करोगाच्या पेशींचे स्थलांतर, आक्रमण आणि एपिथेलियल-मेसेन्कायमल ट्रान्झिशन (EMT) हे ITGA9 शी संबंधित आहेत. मागील अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की ITGA9 हा नॉच पाथवेमधील एक प्रमुख घटक आहे आणि रॅबडोमायोसारकोमाच्या मेटास्टॅसिसमध्ये एक मनोरंजक भूमिका बजावतो (मोलिस्ट एट अल., २०२०). याव्यतिरिक्त, स्तनाच्या कर्करोगासह अनेक प्रकारच्या ट्यूमरमध्ये ITGA9 रुग्णाच्या रोगनिदानाशी जवळून संबंधित असल्याचे आढळले आहे (वांग झेड. एट अल., २०१९). तसेच, ITGA9 च्या बायोइन्फॉर्मेटिक्स विश्लेषणातून असे दिसून आले की TNBC मध्ये त्याची अभिव्यक्ती स्तनाच्या कर्करोगाच्या इतर उपप्रकारांपेक्षा लक्षणीयरीत्या जास्त होती. TNBC रुग्णांमध्ये ITGA9 ची वाढलेली पातळी ट्यूमर मेटास्टॅसिस आणि पुनरावृत्तीशी संबंधित आहे. CRISPR/Cas9 द्वारे ITGA9 चे नॉकआउट केल्याने TNBC मध्ये β-कॅटेनिनच्या ऱ्हासाला चालना देऊन कर्करोग स्टेम सेल (CSC) सारखे गुणधर्म, ट्यूमर अँजिओजेनेसिस, ट्यूमरची वाढ आणि मेटास्टॅसिसमध्ये घट दिसून आली (वांग झेड. एट अल., २०१९).
क्रिप्टो-१ हा TGF-β कुटुंबाचा सदस्य आहे आणि तो प्रारंभिक भ्रूणविकास, स्टेम सेलचे जतन आणि कर्करोगाच्या मेटास्टेसिससाठी महत्त्वपूर्ण आहे (इशी एट अल., २०२१). याला Tdgf-1 असेही ओळखले जाते, हे एक ऑन्कोजेनिक GPI-अँकर्ड सिग्नलिंग प्रोटीन आहे जे प्रिमिटिव्ह स्ट्रीक, मेसोडर्म आणि एंडोडर्मच्या निर्मितीच्या नियमनात, तसेच भ्रूणविकासादरम्यान शरीराच्या अवयवांच्या विकासात डावी/उजवी विषमता स्थापित करण्यात सामील असते (झांग एट अल., २०२१b). याव्यतिरिक्त, क्रिप्टो-१ हा स्टेम सेल मार्कर म्हणून एपिथेलियल-मेसेन्कायमल ट्रान्झिशन (EMT) मध्ये सामील असल्याचे दिसून आले आहे (झांग एट अल., २०२१b). EMT केवळ भ्रूण विकास, फायब्रोसिस आणि जखम भरणे यांसारख्या विविध प्रक्रियांसाठीच नव्हे, तर कर्करोगाचे आक्रमण आणि मेटास्टेसिससाठी देखील महत्त्वपूर्ण आहे. याव्यतिरिक्त, क्रिप्टो-1 चार नॉच रिसेप्टर्सशी संवाद साधते आणि त्यांचे पोस्ट-ट्रान्सलेशनल मॅचुरेशन वाढवते असे दिसून आले आहे (ब्रँडस्टॅडर आणि मेलार्ड, 2019). नॉच सिग्नलिंग पाथवे मानवी स्तनाच्या कर्करोगाच्या पेशींच्या देखभालीमध्ये सामील असल्याचे ज्ञात आहे. अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की CRISPR/Cas9-मध्यस्थ क्रिप्टो-1 चे नॉकआउट कर्करोगाची वाढ आणि मेटास्टॅसिसला दडपते. म्हणून, क्रिप्टो-1 हे TNBC साठी एक महत्त्वाचे उपचारात्मक लक्ष्य बनू शकते (कॅस्ट्रो एट अल., 2015).
XCL12 प्रथिन आणि त्याचे केमोकाइन रिसेप्टर CXC (CXCR4 आणि CXCR7) कर्करोगाच्या पेशींच्या प्रसारात, वाढीत, स्थलांतरात आणि आक्रमणात विविध भूमिका बजावतात (वू एट अल., २०१५). हे केमोरेसेप्टर्स इन विवो आणि इन विट्रो दोन्ही मॉडेल्समध्ये अनेक सिग्नलिंग मार्गांद्वारे TNBC च्या विकासाशी संबंधित असल्याचे आढळले आहे (वू एट अल., २०१५). याव्यतिरिक्त, CXCR4 आणि CXCR7 चे सक्रियकरण TNBC मध्ये मेटास्टॅसिसच्या अधिक संवेदनशीलतेशी आणि खराब रोगनिदानाशी संबंधित आहे (कर्ण एट अल., २०२२). म्हणून, CXCR4 आणि CXCR7 चे नॉकआउट हे TNBC सह स्तनाच्या कर्करोगाच्या उपचारांसाठी प्रभावी औषध लक्ष्य जनुके बनू शकतात. यांग एट अल. यांचा अभ्यास. यांग एट अल (२०१९) यांनी CRISPR/Cas9 वापरून CXCR4 आणि CXCR7 जनुके सह-नॉकआउट केली आणि असे आढळले की TNBC चा प्रसार, वाढ, स्थलांतर आणि आक्रमण लक्षणीयरीत्या रोखले गेले (यांग एट अल., २०१९).
स्तन कर्करोगाच्या ऊतींमध्ये miR-3662, जे एक TNBC ऑन्कोजीन आहे, याची वाढलेली पातळी आढळून आली (यी एट अल., २०२२). miR-3662 चे नॉकडाउन केल्याने इन विवो आणि इन विट्रो दोन्हीमध्ये स्तन कर्करोगाच्या ट्यूमरची वाढ आणि मेटास्टॅसिस रोखले जाते, असे दिसून आले आहे (अग्रवाल आणि गुप्ता, २०२१). HBP-1 हे Wnt/-कॅटेनिन सिग्नलिंगचे एक प्रभावी अवरोधक आहे आणि miR-3662-मध्यस्थीने होणाऱ्या TNBC पेशींच्या वाढीसाठी तेच जबाबदार असण्याची शक्यता आहे. अलीकडेच, यी एट अल. यांनी शोधून काढले की miR-3662-HBP1 अक्ष TNBC पेशींमध्ये Wnt/-कॅटेनिन सिग्नलिंग मार्गाचे नियमन करते (यी एट अल., २०२२). त्याच्या ट्यूमर-विशिष्ट अभिव्यक्तीमुळे, miR-3662 हे TNBC साठी एक संभाव्य उपचारात्मक लक्ष्य असू शकते. त्यामुळे, CRISPR/Cas9-मध्यस्थीने miR-3662 चे नॉकडाउन करणे, हे TNBC च्या उपचारासाठी नवीन औषधे विकसित करण्याकरिता एक उत्कृष्ट दृष्टिकोन असू शकतो.
UBR5 हे एक ३०० kDa न्यूक्लियोफॉस्फोप्रोटीन आहे, जे विविध कर्करोगांमध्ये ट्यूमर निर्मिती, मेटास्टॅसिस आणि रोगप्रतिकार प्रतिसादाचे प्रमुख नियामक म्हणून ओळखले गेले आहे (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023). TNBC नमुन्यांमध्ये UBR5 मोठ्या प्रमाणात वाढलेले आढळले आहे आणि ते त्याच्या युबिक्विटिन लायगेज क्रियेद्वारे प्रसारास प्रवृत्त करून ERα कार्याला उत्तेजित करते (Bolt et al., 2015). प्राथमिक TNBC नमुन्यांच्या संपूर्ण एक्सोम सिक्वेन्सिंग अभ्यासातही UBR5 ची वाढलेली अभिव्यक्ती दिसून आली, जी TNBC च्या विकासातील त्याची भूमिका सूचित करते. याव्यतिरिक्त, प्रायोगिक उंदीर मॉडेल्समध्ये CRISPR/Cas9-चालित UBR5 च्या विलोपनामुळे TNBC मेटास्टॅसिस आणि वाढीवर लक्षणीय प्रतिबंध दिसून आला. शिवाय, वाइल्ड-टाइप उंदीर मॉडेलमध्ये UBR5 चा समावेश केल्याने त्याची पूर्ण कार्यक्षमता पुनर्संचयित झाली, तर निष्क्रिय उत्परिवर्तित स्ट्रेन्समध्ये हा परिणाम दिसून आला नाही (Liao et al., 2017). UBR5 च्या कमतरतेमुळे खराब अँजिओजेनेसिसमुळे TNBC मध्ये एपोप्टोसिस, नेक्रोसिस वाढते आणि ट्यूमरच्या वाढीस प्रतिबंध होतो. UBR5 च्या कमतरतेमुळे, ट्यूमरचा दूरच्या अवयवांमध्ये होणारा प्रसार कमी होतो आणि UBR5 मुख्यत्वे E-कॅडहेरिन अभिव्यक्ती कमी करून असामान्य EMT ला प्रेरित करते (झांग आणि वेनबर्ग, २०१८). अलीकडेच, UBR5 हे TNBC मध्ये IFN-γ-प्रेरित PDL1 ट्रान्सक्रिप्शनमधील एक अत्यंत महत्त्वाचा घटक असल्याचे दिसून आले आहे, कारण त्यात E3 युबिक्विटिनेशन क्रियाकलापाचा अभाव असतो. RNA ट्रान्सक्रिप्टोम विश्लेषणातून असे दिसून आले की UBR5 चे IFN-γ मार्गाशी संबंधित जनुकांवर प्रणालीगत परिणाम होऊ शकतात आणि ते प्रोटीन कायनेज RNA (PKR) आणि त्याचे सिग्नल ट्रान्सड्यूसर आणि ॲक्टिव्हेटर्स ट्रान्सक्रिप्शन 1 (STAT1) आणि इंटरफेरॉन रेग्युलेटरी फॅक्टर 1 (IRF1) यांच्या सक्रियतेची पातळी वाढवून PDL1 ट्रान्सॲक्टिव्हेशनला प्रोत्साहन देऊ शकते. तथापि, CRISPR/Cas9-द्वारे UBR5 आणि PD-L1 अभिव्यक्तीचे एकत्रित उच्चाटन हे एकट्या अवरोधनापेक्षा अधिक सहक्रियात्मक उपचारात्मक परिणाम दर्शवते, ज्याचा ट्यूमरच्या सूक्ष्म वातावरणावर खोलवर परिणाम होतो (वू एट अल., २०२२). अशाप्रकारे, UBR5 चे कार्य रोखण्यासाठी आणि त्याद्वारे TNBC मेटास्टॅसिस व ट्यूमरची वाढ दाबण्यासाठी CRISPR/Cas9 हे एक महत्त्वाचे साधन ठरू शकते.
ROR1 हे एक प्रकार I ट्रान्समेम्ब्रेन प्रथिन आहे जे कर्करोग आणि भ्रूण विकासादरम्यान व्यक्त होते आणि त्याला ऑन्कोफेटल प्रथिन म्हणून ओळखले गेले आहे (निकोलस बोर्चरडिंग, २०१४). विविध मानवी कर्करोगांचे आक्रमक वर्तन ROR1 च्या अपरेग्युलेशनशी संबंधित आहे. ROR1 ला लक्ष्य करणाऱ्या उपचारात्मक संयुगांचा समावेश असलेल्या इन व्हिवो आणि इन व्हिट्रो अभ्यासातून आश्वासक परिणाम प्राप्त झाले आहेत (चिएन एट अल., २०१६). स्तनांच्या ऊतींच्या बायोप्सीमध्ये ROR1 mRNA ची वाढलेली पातळी आक्रमक बेसल-लाइक ब्रेस्ट (BL) ट्यूमर आणि त्यांच्या शरीराच्या इतर भागांमध्ये होणाऱ्या स्थलांतराशी देखील संबंधित आहे. शिवाय, ROR1 चे ओव्हरएक्सप्रेशन हे TNBC च्या विकासासाठी एक रोगनिदानविषयक मार्कर म्हणून ओळखले गेले आहे (चिएन एट अल., २०१६). तथापि, TNBC ची वाढ आणि मेटास्टॅसिस दाबण्यासाठी CRISPR/Cas9 वापरून ROR1 ला सायलेन्स करणे ही एक प्रभावी रणनीती असेल.
सियालेशन प्रक्रियेमध्ये ग्लायकोकॉन्जुगेट्समध्ये सियालिक ऍसिड जोडले जाते, जे सियालिलट्रान्सफरेज (STs) द्वारे उत्प्रेरित होते. ST8SIA1 हे ST कुटुंबातील आहे आणि लिम्फोसायटिक ल्युकेमिया आणि कोलोरेक्टल कर्करोगासारख्या विविध रोगांच्या रोगजननात महत्त्वाची भूमिका बजावते (चांग एट अल., २०१८). आरएनए अनुक्रम विश्लेषण दर्शवते की ST8SIA1 हे TNBC रुग्णांच्या स्तन ऊतींमध्ये उच्च प्रमाणात व्यक्त होते आणि ट्यूमर सप्रेसर जीन p53 मधील उत्परिवर्तनांशी सकारात्मक संबंध दर्शवते, जे TNBC च्या रोगजननात योगदान देऊ शकते (बट्टुला एट अल., २०१७). याव्यतिरिक्त, ST8SIA1 हे TNBC च्या मेटास्टॅसिस आणि पुनरावृत्तीमध्ये सामील आहे, जे सूचित करते की ते TNBC च्या निर्मिती आणि विकासात महत्त्वाची भूमिका बजावते. TNBC च्या इन विट्रो मॉडेलमध्ये, CRIPSR/Cas9 द्वारे ST8SIA1 चे नॉकडाउन केल्याने वाढ आणि मेटास्टॅसिस अवरुद्ध झाल्याचे दिसून आले (बट्टुला एट अल., २०१७). यावरून असे सूचित होते की, TNBC च्या उपचारांमध्ये ST8SIA1 ऑन्कोजीनचे कार्य रोखण्यासाठी CRISPR/Cas9 हे एक महत्त्वाचे साधन असू शकते.
NAT1 हे एक चयापचय एन्झाइम आहे जे फेज II झेनोबायोटिक संयुगांच्या निर्मितीला उत्प्रेरित करते आणि जवळजवळ सर्व मानवी ऊतींमध्ये आढळते. NAT1, ॲरोमॅटिक अमाइन सबस्ट्रेटच्या अनुपस्थितीतही, कोफॅक्टर फोलेटचा वापर करून ॲसिटिल-कोए (acetyl-CoA) ला लक्ष्य करू शकते (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014). अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की NAT1 स्तनाच्या कर्करोगाच्या पेशी मॉडेल्समध्ये मॅट्रिक्स मेटॅलोप्रोटीनेज 9 (MMP9) च्या कार्याचे नियमन करते आणि ग्लुकोजच्या कमतरतेच्या काळात रिॲक्टिव्ह ऑक्सिजन स्पीशीज (ROS) पासून संरक्षण करते (Wang et al., 2018). NAT1 च्या विलोपनामुळे पायरुवेट डिहायड्रोजनेज कॉम्प्लेक्सला प्रतिबंध होतो, ज्यामुळे मायटोकाँड्रियल डिसफंक्शन होते असे दिसून आले आहे (Wang L. et al., 2019). याव्यतिरिक्त, इतर विविध अहवालांमध्ये असे दिसून आले आहे की लहान रेणू आणि siRNA सायलेन्सिंगचा वापर करून NAT1 ला प्रतिबंधित केल्यास स्तनाच्या कर्करोगाच्या पेशींची आक्रमकता आणि प्रसार कमी होऊ शकतो (Stepp et al., 2018). अलीकडेच, MDA-MB-231 या स्तनाच्या कर्करोगाच्या पेशीसमूहामध्ये NAT1 दाबण्यासाठी CRISPR/Cas9 चा वापर करण्यात आला, ज्यामुळे त्याच्या अभिव्यक्ती पातळीनुसार पेशीय चयापचयावर परिणाम होतो. या अभ्यासात असेही दिसून आले की TNBC च्या प्रगती आणि मेटास्टॅसिससाठी NAT-1 महत्त्वपूर्ण आहे (Carlisle et al., 2020).
ऑन्कोजीन्सचे समन्वित ट्रान्सक्रिप्शन सुपर एन्हांसर्स, ट्रान्सक्रिप्शन फॅक्टर्स आणि कोफॅक्टर्सद्वारे नियंत्रित केले जाते (Hnisz et al., 2015). याव्यतिरिक्त, ट्रान्सक्रिप्शनल नियमनासाठी CDK7, CDK8, CDK9, CDK12 आणि CDK13 सारख्या सायक्लिन-डिपेंडेंट कायनेजेसच्या (CDKs) गटाची आवश्यकता असते. त्यापैकी, CDK7 हे RNA पॉलिमरेज II च्या फॉस्फोरायलेशनमध्ये सामील असते, जे TNBC च्या रोगजननामध्ये ऑन्कोजीन ट्रान्सक्रिप्शनच्या प्रारंभासाठी आणि विस्तारासाठी खूप महत्त्वाचे आहे. एका महत्त्वपूर्ण अभ्यासात, CRISPR/Cas9 द्वारे CDK7 काढून टाकल्याने TNBC ला प्रतिबंध झाला, ज्यामुळे असे सूचित होते की TNBC चे रोगजनन CDK7 वर अवलंबून आहे (Wang Y. et al., 2015).
अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की MYC आणि RBP (RNA बाइंडिंग प्रोटीन) मधील उत्परिवर्तनांमुळे एपोप्टोसिस होऊ शकतो, तर MYC किंवा RBP मधील एकल जनुकीय उत्परिवर्तनांचा कर्करोगाच्या पेशींच्या वाढीवर परिणाम होत नाही (आइन्स्टाईन इत्यादी, २०२१). CRISPR/Cas9-आधारित लायब्ररीचा वापर करून मानवी जीनोममधील १००० पेक्षा जास्त RBPs तपासण्यात आले आहेत. त्यापैकी, ५७ RBPs हे MYC ची पातळी अत्यंत वाढलेल्या कर्करोगाच्या पेशींच्या वाढीसाठी महत्त्वपूर्ण असल्याचे आढळले (व्हीलर इत्यादी, २०२०). याव्यतिरिक्त, YTHDF2 हे TNBC पेशींची वाढ टिकवून ठेवण्यासाठी महत्त्वाचे आहे आणि उच्च MYC अभिव्यक्ती असलेल्या कर्करोगाच्या पेशींमध्ये उच्च-स्तरीय ट्रान्सक्रिप्शन आणि ट्रान्सलेशन दरम्यान मिथाइलेटेड ट्रान्सक्रिप्ट्सचे प्रमाण कमी करते. शिवाय, YTHDF2 हे कर्करोगाच्या पेशींसाठी आवश्यक नाही, ज्या TNBC रुग्णांचे आयुष्य वाढवण्यासाठी वाढलेल्या MYC पातळीवर कमी अवलंबून असतात (आइन्स्टाईन इत्यादी, २०२१), ज्यामुळे असे सूचित होते की TNBC वर मात करू शकणाऱ्या औषधांसाठी हे एक संभाव्य उपचारात्मक लक्ष्य असू शकते.
झिंक फिंगर प्रोटीन्स (ZNFs) मानवी जीनोमच्या एकूण १% भाग बनवतात. अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की ZNF यकृताचा कर्करोग, स्तनाचा कर्करोग आणि कोलोरेक्टल कर्करोग यांसारख्या विविध कर्करोगांमध्ये पेशींच्या वाढीचे नियमन करू शकतात (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). CRISPR नॉकआउटद्वारे तयार केलेल्या लायब्ररींचा वापर स्तनाच्या कर्करोगाच्या पेशींमधील विविध ट्यूमर सप्रेसर जीन्स (TSGs) तपासण्यासाठी केला गेला आहे (Shalem et al., 2014). तेव्हापासून, CRISPR/Cas9 ZNF319-वगळलेल्या स्तनाच्या कर्करोगाच्या पेशींच्या ट्रान्सक्रिप्टोमिक अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की ZNF319 हा एक ट्यूमर सप्रेसर जीन आहे जो स्तनाच्या कर्करोगाची वाढ कमी करतो आणि म्हणूनच तो विविध संभाव्य सिग्नलिंग यंत्रणा आणि इतर जैविक कार्यांमध्ये सामील आहे (Wang L. et al., 2022).
फेरोप्टोसिस हा एक प्रकारचा नियोजित पेशी मृत्यू आहे जो लोहाच्या उपस्थितीवर अवलंबून असतो. हे ज्ञात आहे की फेरोप्टोसिसचा विकास लिपिड पेरोक्साइडच्या उपस्थितीमुळे प्रभावित होतो. याव्यतिरिक्त, PKCβII लवकर लिपिड पेरोक्सिडेशन दर्शवते असे नोंदवले गेले आहे, आणि वाढलेले लिपिड पेरोक्सिडेशन फेरोप्टोसिसशी संबंधित आहे. CRISPR/Cas9-मध्यस्थी किनेज इनहिबिटरच्या लायब्ररीच्या तपासणीतून असे दिसून आले की PKCβII लिपिड पेरोक्सिडेशनच्या प्रक्रियेत सामील आहे, जे MDA-MB-231 पेशींमध्ये फेरोप्टोसिससाठी महत्त्वपूर्ण आहे (झांग एट अल., २०२२). म्हणून, हे सूचित करते की CRISPR/Cas9 द्वारे PKCβII चे नॉकआउट हे फेरोप्टोसिस-संबंधित रोगांच्या उपचारांसाठी एक संभाव्य ट्यूमर सप्रेसर जीन लक्ष्य असू शकते (झांग एट अल., २०२२).
कर्करोगाच्या रुग्णांमधील सुमारे ९०% मृत्यूंसाठी औषध-प्रतिकारशक्ती जबाबदार असल्याचे मानले जाते आणि कर्करोगाच्या उपचारांमधील हे एक प्रमुख आव्हान आहे (बुकोव्स्की इत्यादी, २०२०). निष्कर्षांनुसार, औषध उत्सर्जन, डीएनए दुरुस्ती, ॲपोप्टोसिस आणि विविध पेशी संकेतन मार्गांशी संबंधित पुरेशा संख्येने जनुके औषध-प्रतिकारशक्तीशी निगडित आहेत (हैदर इत्यादी, २०२०). त्यापैकी, अनेक जनुकांना CRISPR/Cas9 साधनांद्वारे लक्ष्य केले गेले आहे आणि त्यांनी औषध-प्रतिकारशक्ती कमी करण्यात व कर्करोगविरोधी उपचारांची परिणामकारकता वाढविण्यात आश्वासक परिणाम दर्शविले आहेत (वाघारी-तबारी इत्यादी, २०२२). याव्यतिरिक्त, संभाव्य औषध-प्रतिकारशक्ती जनुकांच्या लक्ष्यांचे कार्य सुधारण्यासाठी उच्च-थ्रुपुट CRISPR/Cas9 जीन नॉकआउट स्क्रीनिंग लायब्ररींचा वापर केला गेला आहे (शालेम इत्यादी, २०१५). पॅक्लिटॅक्सेल प्रतिरोधक जनुके ओळखण्यासाठी, RNA सिक्वेन्सिंग आणि जीनोम-व्यापी sgRNA लायब्ररी स्क्रीनिंगचा वापर करून आठ संभाव्य जनुके ओळखण्यात आली, ज्यात हिस्टोन डीएसेटिलेज 9 (HDAC9) चा समावेश आहे, जी वारंवार होणाऱ्या TNBC रुग्णांमधील औषध-प्रतिरोधकतेशी संबंधित आहेत (B et al., 2020). दुसऱ्या एका अभ्यासात, कर्करोगविरोधी औषधांनी उपचार केलेल्या TNBC रुग्णांच्या जगण्याच्या काळात डिसरीन/थ्रिओनिन आणि टायरोसिन प्रोटीन कायनेज (DSTYK) ची वाढलेली अभिव्यक्ती दिसून आली. शिवाय, CRISPR/Cas9-मध्यस्थ DSTYK नॉकडाऊनमुळे इन विट्रो (SUM102PT पेशी आणि MDA-MB-468 पेशी) आणि इन व्हिवो TNBC मॉडेलमध्ये औषध-प्रतिरोधक कर्करोग पेशींच्या एपोप्टोसिसमध्ये लक्षणीय वाढ झाली (Ogbu et al., 2021).
जरी TNBC मध्ये MAPK मार्गाचे असामान्य सक्रियकरण असले तरी, MEK-लक्ष्यित उपचारांचा क्लिनिकल परिणाम कमी असतो. CRISPR/Cas9 जीनोमिक लायब्ररी स्क्रिनिंगमधून असे दिसून आले की PSMG2 (प्रोटिओम असेंब्ली चॅपरॉन 2) चे अवरोधन TNBC BT549 आणि MB468 पेशींना MEK अवरोधक AZD6244 साठी संवेदनशील बनवते. PSMG2 च्या CRISPR/Cas9 नॉकडाऊनमुळे सामान्य प्रोटिओसोम कार्यात बदल झाला, ज्यामुळे ऑटोफॅगी-मध्यस्थीने PDPK1 चे विघटन झाले आणि परिणामी AZD6244 (MEK अवरोधक) आणि MG132 (प्रोटिओसोम अवरोधक) द्वारे प्रेरित TNBC माऊस मॉडेल्समधील ट्यूमर पेशींमध्ये आणखी सुधारणा झाली. अशाप्रकारे, ट्यूमर पेशींचा प्रसार कमी करण्यासाठी प्रोटिओसोम आणि MAP काइनेज (MEK) अवरोधक एकत्रितपणे दिले जाऊ शकतात (Wang X. et al., 2022).
CRISPR/Cas9 चा वापर TNBC प्रतिकारशक्तीस कारणीभूत ठरणाऱ्या जनुकीय कार्याच्या हानीची तपासणी करण्यासाठी देखील केला गेला आहे (शू एट अल., २०२०). गे एट अल यांनी TNBC मध्ये JQ1, जे एक BET ब्रोमोडोमेन इनहिबिटर (BBDI) आहे, याने उपचार केलेल्या कर्करोगाच्या पेशींच्या औषध प्रतिकारशक्तीची यंत्रणा स्पष्ट केली. CRISPR/Cas9 चा वापर करून, त्यांना आढळले की rb1 जनुकीय काढून टाकल्यामुळे TNBC हे कर्करोगविरोधी औषध JQ1 ला प्रतिरोधक बनले. म्हणून, TNBC मध्ये JQ1 औषधांच्या प्रतिसादात rb1 चे कार्य महत्त्वाचे आहे. त्यांनी असेही नोंदवले की पॅक्लिटॅक्सेल हे एक CDK4/6 कायनेज/मायक्रोट्यूब्यूल इनहिबिटर आहे, आणि JQ1 सारख्या BBDI सोबत त्याचे संयोजन औषध-प्रतिरोधक TNBC साठी आश्वासक उपचारात्मक प्रतिसाद देऊ शकते (गे एट अल., २०२०).
TNBC मध्ये निओॲडज्युव्हेंट थेरपीला होणाऱ्या प्रतिकारासाठी लाँग नॉनकोडिंग आरएनए (lncRNA) चे ट्रान्सक्रिप्शनल स्वरूप जबाबदार असल्याचे नोंदवले गेले आहे. या अभ्यासात असे दिसून आले आहे की TNBC मध्ये पाच वेगवेगळे MALAT1 lncRNA ट्रान्सक्रिप्ट्स उच्च प्रमाणात व्यक्त होतात. याव्यतिरिक्त, CRISPR/Cas9-द्वारे MALAT1 काढून टाकल्याने TNBC BT-549 पेशींची पॅक्लिटॅक्सेल आणि डॉक्सोरुबिसिनप्रती संवेदनशीलता वाढली, जे TNBC मध्ये MALAT1 प्रतिकाराच्या संभाव्य भूमिकेचे सूचन करते (शाथ आणि इतर, २०२१).
BRCA1 (BRCA1m) मधील उत्परिवर्तने विषम स्वरूपाची असतात आणि त्यामुळे ती शोधणे कठीण असते. BRCA1 चा सिंथेटिक लेथल पार्टनर असलेल्या PARP1 (पॉली(एडीपी-रायबोज) पॉलिमरेज) ला लक्ष्य केल्याने TNBC ची औषध संवेदनशीलता वाढू शकते. CRISPR/Cas9 चा वापर करून, PARP1 काढून टाकल्याने mBRCA1 उत्परिवर्तित TNBC पेशींप्रति डॉक्सोरुबिसिन, जेमसायटाबीन आणि डोसेटॅक्सेल यांसारख्या कर्करोगविरोधी औषधांची संवेदनशीलता वाढली, यावरून असे सूचित होते की TNBC मधील औषध-प्रतिकारशक्तीमध्ये PARP1 चा देखील सहभाग असतो (Vaghari-Tabari et al., 2022). . ट्यूमर सप्रेसर जीन्स BRCA1 किंवा BRCA2 मधील उत्परिवर्तनांमुळे लोकांमध्ये स्तनाचा कर्करोग होण्याची शक्यता वाढते हे ज्ञात आहे. या रुग्णांच्या उपचारासाठी PARP इनहिबिटर्सचा वापर आवश्यक असतो. याव्यतिरिक्त, हे सिद्ध झाले आहे की CRISPR/Cas9 वापरून न्यूक्लियोटाइड साल्वेज फॅक्टर DNPH1 चा नॉकआउट केल्याने विषारी न्यूक्लियोटाइड 5-हायड्रॉक्सीमेथिलडीऑक्सीयुरिडिन (hmdU) मोनोफॉस्फेट काढून टाकता येतो, ज्यामुळे BRCA-कमतरता असलेल्या पेशींची PARP इनहिबिटर्सच्या संवेदनशीलतेस प्रतिसाद वाढतो (फगर एट अल., २०२१). अशाप्रकारे, CRISPR/Cas9 आणि PARP1 इनहिबिटर्स हे TNBC साठी एक महत्त्वाचे उपचार धोरण बनू शकतात.
पेनिट्रंट ग्लायकोप्रोटीन (P-gp) जीन हे एक मल्टीड्रग रेझिस्टन्स जीन आहे जे साधारणपणे सर्व TNBC पैकी सुमारे ४१% मध्ये अपरेग्युलेटेड असते (सन एट अल., २०२०). स्तनाच्या कर्करोगामध्ये औषध-प्रतिरोधकतेचा एक प्रमुख नियामक म्हणून P-gp-प्रेरित ड्रग इफ्लक्स ओळखला गेला आहे. P-gp इनहिबिटर्सनी स्तनाच्या कर्करोगामध्ये कर्करोगविरोधी औषधांप्रति वाढलेली संवेदनशीलता दर्शविली आहे (फामटा एट अल., २०२१). त्यामुळे, TNBC मधील औषध-प्रतिरोधकतेवर मात करण्यासाठी CRISPR/Cas9-मध्यस्थीने P-gp चे निर्मूलन किंवा दमन आणि P-gp इनहिबिटर्स या अत्यंत महत्त्वाच्या पद्धती असू शकतात.
एटीपी-बाइंडिंग कॅसेट ट्रान्सपोर्टर जी२ (ABCG2) मुळे टीएनबीसीमध्ये (TNBC) औषध प्रतिरोध निर्माण होतो हे ज्ञात आहे (Palasuberniam et al., 2015), तथापि, CRISPR/Cas9 आणि ABCG2 सायलेन्सिंग व ट्यूमर सप्रेसर जीन इनअॅक्टिव्हेशन यांच्यातील संबंधावर सध्या कोणतेही अहवाल उपलब्ध नाहीत. PTEN हे ABCG2 चे सक्रियकरण वाढवू शकते (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021). त्यामुळे, ABCG2 काढून टाकण्यासाठी CRISPR/Ca9 चा वापर करणे आणि त्याला ABCG2 इनहिबिटरसोबत जोडणे, हे टीएनबीसीमधील औषध प्रतिरोधावर मात करण्यासाठी एक योग्य उपचार असू शकतो. तक्ता २ मध्ये सर्व रेझिस्टन्स जीन्सना लक्ष्य करणाऱ्या CRISPR/Cas9 चा उल्लेख आहे.
तक्ता २. CRISPR/Cas9 विविध TNBC प्रतिकार जनुकांना लक्ष्य करून पेशींना कर्करोगविरोधी औषधांसाठी संवेदनशील बनवते.
CRISPR/Cas9 लायब्ररीज या कर्करोगाच्या रोगजननाशी संबंधित जनुकीय उत्परिवर्तने तपासण्यासाठी संभाव्य साधने आहेत (चान आणि इतर, २०२२). या तपासणी पद्धतीमध्ये (अ) लायब्ररीची निर्मिती, (ब) लेंटिव्हायरल ट्रान्सडक्शन, (क) फेनोटाइपिक तपासणी, आणि (ड) लक्ष्य जनुकीय विश्लेषण अशा चार टप्प्यांचा समावेश असतो. जरी TNBC मध्ये MAPK मार्गाचे असामान्य सक्रियण असले तरी, PTEN, RB1, आणि TP53 सारख्या ट्यूमर सप्रेसर जनुकांमधील उत्परिवर्तने असलेल्या TNBC रुग्णांसाठी MEK लक्ष्यित थेरपीचा क्लिनिकल रोगनिदान खूपच खराब असतो.
याव्यतिरिक्त, ग्वाटेमालाच्या फुलांच्या आणि पानांच्या अर्कांमध्ये मुबलक प्रमाणात आढळणाऱ्या, सर्वात प्रभावी आणि निवडक रेणू, डीहायड्रोकॅट्रॉलची, MDA-MB-231 वरील परिणाम समजून घेण्यासाठी CRISPR/Cas9 वापरून केलेल्या जीन नॉकआउट स्क्रीनद्वारे चाचणी घेण्यात आली. निवडक पेशी सायटोटॉक्सिसिटीची यंत्रणा. TNBC उपप्रकारांची मेसेन्कायमल स्टेमनेस वैशिष्ट्ये. या CRISPR/Cas9-आधारित स्क्रीनमधून हे देखील उघड झाले की, 17β-हायड्रॉक्सीस्टेरॉइड डीहायड्रोजनेज प्रकार 11 साठी कोड करणारे HSD17B11 हे जीन MDA-MB-231 पेशींमध्ये मोठ्या प्रमाणात व्यक्त होते आणि त्यामुळे MDA-MB-231 पेशींसाठी विशिष्ट असलेले डीहायड्रोफाल्कारिनॉल तयार होते (ग्रँट इत्यादी, 2020). अशाप्रकारे, हे सूचित करते की संभाव्य नैसर्गिक संयुगांच्या कर्करोगविरोधी गुणधर्मांमागील यंत्रणा ओळखण्यासाठी CRISPR/Cas9 जीनोमिक स्क्रीनिंगमध्ये मोठी क्षमता आहे.
याव्यतिरिक्त, एका निष्पक्ष जीनोम-व्यापी इन व्हिवो CRISPR/Cas9 स्क्रीनचा वापर करून TNBC ची कर्करोगाप्रती असलेली संवेदनशीलता अभ्यासली गेली, ज्याने ऑन्कोजेनिक आणि ट्यूमर सप्रेसर मार्गांमध्ये एक दुवा दर्शवला. mTOR आणि हिप्पो मार्गांचे प्रमुख घटक TNBC मध्ये ट्यूमरच्या नियमनात महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावतात असे नोंदवले गेले आहे. याव्यतिरिक्त, अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की, इन व्हिट्रो ड्रग-मॅट्रिक्स सिनर्जी मॉडेल आणि इन व्हिवो पेशंट-डेरिव्हड झेनोग्राफ्ट्सचा वापर करून, mTORC1/2 आणि YAP ऑन्कोप्रोटीनचे औषधीय प्रतिबंध TNBC ची रोगजनकता प्रभावीपणे रोखते. शिवाय, टोरिन-1-मध्यस्थ mTORC1/2 प्रतिबंध मॅक्रो पिनोसायटोसिस वाढवतो, तर व्हर्टेपोरफिन-प्रेरित YAP प्रतिबंधामुळे TNBC पेशींचा मृत्यू होतो. एकत्रितपणे, हे परिणाम TNBC साठी नवीन आणि प्रभावी उपचार ओळखण्याकरिता जीनोम-व्यापी इन व्हिवो CRISPR स्क्रीनिंगची शक्ती आणि मजबुती अधोरेखित करतात (Dai et al., 2021).
रोगप्रतिकार प्रणालीतील बिघाड हा ट्यूमरच्या निर्मितीमधील एक महत्त्वाचा घटक आहे. कर्करोगाच्या पेशी संरक्षण यंत्रणांना टाळून रोगप्रतिकारक शक्तीच्या निर्मूलनापासून स्वतःचा बचाव करतात, ज्यामध्ये ट्यूमरच्या सूक्ष्म वातावरणातील रोगप्रतिकारक पेशींच्या कार्यात व्यत्यय आणणे आणि रोगप्रतिकारक प्रणालीला कमकुवत करणे यांचा समावेश आहे. त्यामुळे, सुधारित रोगप्रतिकारक प्रणाली विकसित करणे हा ट्यूमरशी लढण्याचा एक महत्त्वाचा मार्ग असू शकतो. CRISPR/Cas9-आधारित जनुकीय बदलाचा वापर रोगप्रतिकारक शक्तीच्या बिघाडाशी संबंधित अनेक समस्यांना वेगवेगळ्या दृष्टिकोनातून हाताळतो. CRISPR/Cas9 चा वापर खालील मार्गांनी स्तनाच्या कर्करोगाविरुद्ध ट्यूमरविरोधी रोगप्रतिकारशक्ती सुधारण्यासाठी केला गेला आहे (आकृती ३).
आकृती ३. CRISPR/Cas9 इम्युनोथेरपी TNBC पेशींना लक्ष्य करते. CDK5 चा लोप आणि PDL1 व CD155 चे नॉकडाउन रोगप्रतिकार प्रणालीला चालना देतात. त्याचप्रमाणे, A2AR चा लोप आणि HER2, म्युसिन १ व TEM8 सारख्या TAA चे नॉकडाउन केल्याने कर्करोगाच्या पेशींना मारण्यात CAR-T पेशींची कार्यक्षमता वाढली. CRISPR/Cas9-चालित टी-सेल स्क्रिनिंगने दाखवले आहे की p38 कायनेजच्या विघटनामुळे टी-सेलची कर्करोगविरोधी क्रियाशीलता वाढते. CRISPR/Cas9 द्वारे सुधारित केलेल्या टी-पेशी TCR (टी-सेल रिसेप्टर) ची अभिव्यक्ती वाढवतात, ज्यामुळे टी-पेशींमध्ये कर्करोगविरोधी क्रियाशीलता निर्माण होते.
इम्युनोथेरपीचे उद्दिष्ट रोगप्रतिकार प्रणालीला कर्करोगाच्या पेशींवर हल्ला करण्यासाठी उत्तेजित करणे हे आहे. इम्युन चेकपॉइंट प्रथिनांचे अतिअभिव्यक्ती सामान्यतः ऑटोइम्युन प्रतिक्रिया टाळते, परंतु कर्करोगाला त्या टाळण्यास मदत करू शकते (टोपालियन एट अल., २०१५). ही प्रथिने रोगप्रतिकार पेशींच्या पृष्ठभागावरील रिसेप्टर्सना बांधून रोगप्रतिकार प्रतिक्रिया टाळतात. अनेक चेकपॉइंट प्रथिने (जसे की CD155 आणि PD-L1) रोगप्रतिकार पेशींवरील PD-1 रिसेप्टरला लक्ष्य करतात आणि स्तनाच्या कर्करोगात, विशेषतः TNBC मध्ये व्यक्त होतात (ली वाय.-सी. एट अल., २०२०). CRISPR/Cas9 वापरून PD-L1 किंवा त्याच्या रिसेप्टरचे नॉकडाउन केल्याने रोगप्रतिकार प्रणालीला TNBC ट्यूमरवर हल्ला करण्यासाठी उत्तेजित करता येते (याहाता एट अल., २०१९). याव्यतिरिक्त, CRISPR/Cas9-मध्यस्थीने CDK5 काढून टाकून PD-L1 अभिव्यक्ती कमी केल्याने इन विट्रो आणि इन व्हिवोमध्ये ट्यूमरची वाढ रोखली जाते असे दिसून आले आहे (डेंग एट अल., २०२०). स्तन कर्करोगाच्या इन विट्रो आणि इन व्हिवो मॉडेल्समध्ये वाढीस प्रतिबंध हे सूचित करतो की shRNA-मध्यस्थीने CD155 कमी केल्याने स्तन कर्करोगावर उपचारात्मक परिणाम होऊ शकतो (गाओ एट अल., 2018).
CAR T पेशी ट्यूमर-संबंधित प्रतिजन (TAAs) ओळखणारे CARs व्यक्त करतात आणि त्यांची क्रियाशीलता वाढवण्यासाठी चेकपॉइंट प्रथिनांचे नॉकडाउन वापरू शकतात (ली सी. इत्यादी, २०२०). स्तनाच्या कर्करोगामध्ये CAR T पेशी थेरपीसाठी विविध संभाव्य लक्ष्ये आहेत, ज्यात HER2, म्युसिन1 आणि TEM8 सारख्या अनेक TAAs चा समावेश आहे (बजगेन इत्यादी, २०१८). असा पुरावा आहे की मेसोथेलिनला (TNBC BT-459 पेशींमध्ये अतिव्यक्त होणारे) लक्ष्य करणाऱ्या CAR T पेशी, CRISPR/Cas9 वापरून PD-1 काढून टाकल्यावर कर्करोगाविरुद्ध अधिक प्रभावी ठरतात (हू इत्यादी, २०१९). तथापि, रुग्णांमधून T पेशी वेगळ्या करणे आणि नंतर शरीराबाहेर (ex vivo) त्यांचे संपादन करणे ही एक श्रम-केंद्रित आणि वेळखाऊ प्रक्रिया आहे. जरी युनिव्हर्सल T पेशी विलगीकरणाची आवश्यकता कमी करू शकतात, तरीही ग्राफ्ट-व्हर्सस-होस्ट विकृती टाळण्यासाठी मानवी ल्युकोसाइट प्रतिजन (HLA) वर्ग I आणि T पेशी रिसेप्टर (TCR) व्यक्त करणाऱ्या दाता T पेशी काढून टाकल्या पाहिजेत (रेन इत्यादी, २०१७). , 2017a). CRISPR/Cas9 वापरून, HDR एकाच वेळी TCR आणि HLA काढून टाकू शकते आणि CAR एन्कोड करणाऱ्या जनुकाला निष्क्रिय करू शकते. अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की CRISPR/Cas9 चा वापर TCR लोकसमध्ये अँटी-CD19 CARs आणण्यासाठी केला जाऊ शकतो, ज्यामुळे टी पेशींचा ऱ्हास न करता कार्यक्षमतेने CARs तयार करता येतात (दिमित्री इत्यादी, 2022). TCR, बीटा-2-मायक्रोग्लोब्युलिन (B2M), HLA-I सबयुनिट आणि PD-1 व CTLA-4 सारखी इतर प्रथिने, ज्यांमध्ये TNBC विरुद्ध अधिक कर्करोग-विरोधी गुणधर्म असू शकतात, यांना एकाच वेळी काढून टाकून ॲलोजेनिक CAR T पेशी तयार करण्यासाठी मल्टिप्लेक्स तंत्रज्ञान विकसित केले गेले आहे (आयकेम इत्यादी, 2017; लिऊ इत्यादी, 2017; रेन इत्यादी, 2017b; दिमित्री इत्यादी, 2022).
CRISPR/Cas9 चा वापर केल्याने CAR-T पेशींची परिणामकारकता सुधारू शकते. ॲडेनोसिनमध्ये रोगप्रतिकारशक्ती दाबण्याचे गुणधर्म असल्याचे ज्ञात आहे आणि ते टी-पेशींचे कार्य रोखून व ॲडेनोसिन A2A रिसेप्टर्स (A2AR) सक्रिय करून कर्करोगविरोधी प्रतिकारशक्ती कमी करू शकते (Vigano et al., 2019). CRISPR/Cas9 वापरून A2AR निष्क्रिय केल्याने शरीरांतर्गत (in vivo) CAR-T पेशींच्या कार्यक्षमतेत लक्षणीय सुधारणा झाली (Giuffrida et al., 2021). टी-पेशींमध्ये पेशींचा विस्तार, विभेदन, ऑक्सिडेटिव्ह ताण आणि जीनोमिक ताण यांसारखी विविध बाह्यलक्षणी वैशिष्ट्ये दिसून येतात. CRISPR/Cas9-आधारित टी-पेशींच्या तपासणीत २५ वेगवेगळ्या टी-पेशी रिसेप्टर कायनेजेसमध्ये व्यत्यय आल्याचे दिसून आले. त्यापैकी, p38 कायनेज काढून टाकल्याने टी-पेशींची कर्करोगविरोधी क्रियाशीलता वाढते असे दिसून आले आहे, जे सूचित करते की p38 कायनेज हे CAR-T पेशींच्या नियमनाचे एक प्रमुख नियामक आहे (Gurusamy et al., 2020).
उच्च प्रमाणात व्यक्त होणारे TCRs तयार करण्यासाठी CRISPR/Cas9 वापरून टी पेशींमध्ये जनुकीय बदल केले जाऊ शकतात. रुग्णांमध्ये जनुकीय बदल केलेल्या टी पेशी हस्तांतरित केल्यावर, नैसर्गिक टी पेशींपेक्षा अधिक प्रभावी कर्करोगविरोधी क्रिया दिसून आली आहे. त्यामुळे, रुग्णांमध्ये नैसर्गिक TCRs हे जनुकीय बदल केलेल्या TCRs सोबत स्पर्धा करू शकतात, ज्यामुळे कर्करोग इम्युनोथेरपीच्या क्षमतेवर परिणाम होऊ शकतो. या समस्येवर मात करण्यासाठी, CRISPR/Cas9 वापरून प्राप्तकर्ता पेशींमधील नैसर्गिक TCR-β काढून टाकणे आणि त्यानंतर TCR-β टी पेशी कर्करोग रुग्णांमध्ये हस्तांतरित करणे, हे नैसर्गिक TCR लैंगिक स्पर्धेची गरज न भासता अधिक चांगला कर्करोगविरोधी रोगप्रतिकारक प्रतिसाद दर्शवू शकते (फॅन एट अल. २०१८). अशाप्रकारे, CRISPR-बदल केलेल्या टी पेशी वगळता, सामान्य TCR-ट्रान्सड्यूस्ड टी पेशींच्या तुलनेत TCRs ट्यूमर अँटीजेन्ससाठी हजार पटीने अधिक संवेदनशील असतात. याव्यतिरिक्त, विविध ल्युकेमियामध्ये, γδ TCR+ CRISPR द्वारे तयार केलेल्या बदललेल्या टी पेशी, मानक TCR हस्तांतरणाच्या तुलनेत CD4+ आणि CD8+ टी पेशींची उच्च अभिव्यक्ती दर्शवतात (लेगट एट अल., २०१८). अशाप्रकारे, CRISPR/Cas9 द्वारे तयार केलेल्या सुधारित टी पेशी TNBC वर मात करण्यासाठी एक प्रभावी इम्युनोथेरपी पद्धत असू शकते.
इंटीग्रिन्स हे पेशी आसंजन रेणू आहेत जे पेशींच्या ट्रान्समेम्ब्रेनमध्ये उपस्थित असतात आणि पेशींना एक्स्ट्रासेल्युलर मॅट्रिक्स (ECM) शी जोडण्यास प्रोत्साहन देतात (हमीदी आणि इवास्का, २०१८). इंटीग्रिन्सचे नियमन बिघडल्यास एक्स्ट्रासेल्युलर मॅट्रिक्समध्ये बदल होऊन कर्करोगाचा विकास आणि स्थलांतर होते, ज्यामुळे रक्ताभिसरणात कर्करोगाच्या पेशी टिकून राहतात (हमीदी आणि इवास्का, २०१८). CRISPR/Cas9-मध्यस्थ इंटीग्रिन नॉकडाउनमुळे TNBC मध्ये ट्यूमरची वाढ, मेटास्टॅसिस आणि वसाहत मंदावते. इंटीग्रिन a5 (ITGA5) च्या नॉकडाउनमुळे फुफ्फुसाच्या कर्करोगासारख्या इतर कर्करोगांमध्ये पेशींचे स्थलांतर आणि वाढ कमी होते असे नोंदवले गेले आहे (जू इत्यादी, २०१७), यावरून असे सूचित होते की इंटीग्रिन a5 हा TNBC च्या रोगजननामध्ये देखील एक महत्त्वाचा घटक असू शकतो.
पारंपारिक एम्ब्रियोनिक स्टेम (ES) सेल पद्धती वापरून नॉकआउट उंदीर तयार करणे ही एक श्रमसाध्य, वेळखाऊ आणि अकार्यक्षम प्रक्रिया आहे. होमोलॉगस रिकॉम्बिनेशनद्वारे ES पेशींना लक्ष्य करणे, कायमेरिक उंदरांची पैदास करणे आणि नंतर होमोझायगस संतती निर्माण करण्यासाठी त्यांना हेटेरोझायगस उंदरांसोबत क्रॉस करण्यासाठी महिने आणि वर्षे लागतात. अनेक जनुकीय उत्परिवर्तन असलेले उंदीर तयार करण्यासाठी जटिल क्रॉसब्रीडिंगची आवश्यकता असते. तथापि, CRISPR/Cas9 वापरून ES पेशींचे निर्मूलन करून किंवा एकपेशीय फलित अंड्यांमध्ये CRISPR/Cas9 घटक मायक्रोइंजेक्शनद्वारे तयार केलेल्या उंदरांचा वापर करताना अनेक समस्या उद्भवल्या आहेत. उदाहरणार्थ, बदलांची ओळख अनेकदा बायअलेलिक लोसायवर होते आणि ते जनुकीय विशिष्ट नसतात. अलीकडेच असे वृत्त आले आहे की CRISPR/Cas9 तंत्रज्ञान वापरणाऱ्या ES पेशी एकाच वेळी ५ जनुकांपर्यंत बायअलेलिक उत्परिवर्तन टाकू शकतात (निशिझोनो एट अल., २०२१). या उद्देशासाठी, Cas9 mRNA आणि पाच जनुकीय-विशिष्ट gRNA एकाच वेळी ES पेशींमध्ये ट्रान्सफेक्ट केले गेले. यामुळे या प्रक्रियेची क्षमता आणि परिणामकारकता अधोरेखित होते, जरी क्विंटपल नॉकआउट उंदीर तयार करण्यासाठी संस्थापक वंशांची पैदास केली गेली तेव्हा हे उत्परिवर्तन पुढे संक्रमित झाले असण्याची शक्यता आहे. या अभ्यासात एक आश्चर्यकारक शोधही नोंदवला गेला आहे: जनुकीयदृष्ट्या सुधारित उंदीर तयार करण्यासाठी आता ES पेशींची आवश्यकता नाही. त्याऐवजी, विशिष्ट जनुकीय उत्पादने काढून टाकण्यासाठी, Cas9 mRNA आणि gRNA एकपेशीय अवस्थेतील भ्रूणांमध्ये इंजेक्ट केले गेले. परिणामी, नॉकआउट संस्थापक वंश तयार केले गेले आहेत, ज्यांचा सैद्धांतिकदृष्ट्या उंदरांमध्ये जनुकीय विलोपनाच्या परिणामांचा अभ्यास करण्यासाठी उपयोग केला जाऊ शकतो (किन एट अल., २०१६). अशाप्रकारे, CRISPR/Cas9 पारंपरिक जनुकीय अभियांत्रिकीपेक्षा कमी खर्चात TNBC वर उपचार करण्यासाठी ट्रान्सजेनिक उंदीर तयार करण्यास परवानगी देते. CRISPR/Cas प्रणालीचा वापर करून, एक नवीन नॉकआउट उंदीर मॉडेल विकसित केले गेले आहे जे TNBC मधील एक किंवा अधिक अंतर्जात जनुकांमध्ये यशस्वीरित्या बिंदू उत्परिवर्तन घडवून आणू शकते. या संकल्पनेवर आधारित, BRCA1 आणि p53 चे CRISPR/Cas9-मध्यस्थीने विलोपन वापरून TNBC चे प्राणी मॉडेल देखील विकसित केले जाऊ शकतात, ज्यामुळे HR दुरुस्तीचे नुकसान, जीनोमिक अस्थिरता आणि उत्परिवर्तित फिनोटाइप होतात (Annunziato et al., 2020).
सध्या, TNBC चे निदान करण्यासाठी मॅमोग्राफी, मॅग्नेटिक रेझोनन्स इमेजिंग (MRI) आणि अल्ट्रासाऊंड यांसारख्या विविध पद्धती वापरल्या जातात. तथापि, या पद्धतींना काही मर्यादा आहेत. मॅमोग्राफीचा उपयोग मेटास्टॅसिसऐवजी स्थानिक स्तन ऊतींचे निदान करण्यासाठी केला जातो, जिथे कर्करोगाच्या पेशी इतर अवयवांमध्ये पसरलेल्या असतात. अल्ट्रासोनोग्राफी ही TNBC चे निदान करण्यासाठी एक विश्वसनीय पद्धत नाही (चेन आणि ली-फेलकर, २०२३). MRI ची संवेदनशीलता अल्ट्रासाऊंड आणि मॅमोग्राफीपेक्षा जास्त आहे, परंतु त्याची निदानात्मक अचूकता मर्यादित आहे (शा आणि चेन, २०२२). ऊतींची बायोप्सी ही कर्करोगाच्या पेशी ओळखण्याची एक आक्रमक पद्धत आहे. तथापि, काही प्रकरणांमध्ये, जर सुई तपासणीच्या अपेक्षित भागापासून दूर गेली, तर बायोप्सीमध्ये कर्करोगाच्या ऊती सुटू शकतात. याव्यतिरिक्त, ही पद्धत खूप महाग आहे आणि रुग्णासाठी क्लेशकारक असू शकते. TNBC हा कर्करोगाचा एक विषम प्रकार आहे, त्यामुळे बायोप्सीमधून कर्करोगाच्या प्रकाराबद्दल पुरेशी माहिती मिळू शकत नाही. म्हणून, TNBC शोधण्यासाठी एका नवीन निदानात्मकदृष्ट्या विश्वसनीय पद्धतीची तातडीने गरज आहे. CRISPR/Cas9 हे स्तनाच्या कर्करोगाच्या निदानासाठी एक अत्यंत संवेदनशील आणि कमीत कमी आक्रमक पर्याय म्हणून काम करू शकते. यासाठी, TNBC च्या निदानासाठी PCR पद्धती सुधारण्याकरिता CRISPR/Cas9-आधारित कार्यप्रणाली वापरल्या जाऊ शकतात. प्रथम, CRISPR प्रणालीतील Cas9 आणि cpf1 प्रथिने विशिष्ट नसलेला DNA काढून टाकण्यासाठी वापरली जातात, आणि नंतर ही दोन प्रथिने (Cas9 आणि cpf1) लक्ष्य DNA ला जोडण्यापूर्वी PAM अनुक्रम ओळखू शकतात (दीपक सिंग इत्यादी, २०२१). अशाप्रकारे, PCR कर्करोगाच्या विकासाशी संबंधित उत्परिवर्तने ओळखू शकते. अनेक अभ्यासांमध्ये वेगवेगळ्या कर्करोगांमधील विविध उत्परिवर्तने शोधण्यासाठी ही CRISPR-आधारित कार्यप्रणाली अवलंबली गेली आहे (सफारी इत्यादी, २०१९). अशाप्रकारे, CRISPR-आधारित PCR पद्धती बायोप्सी-आधारित इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्रीसारख्या आक्रमक पद्धतींवरील TNBC निदानाचे अवलंबित्व कमी करू शकतात.
TNBC मध्ये हार्मोन रिसेप्टर नियमनातील जनुकीय बदल देखील दिसून आले आहेत (चेन आणि रुसो, २००९). पॉइंट-ऑफ-केअर निदानासाठी मायक्रोअरे वापरणाऱ्या CRISPR/Cas9-आधारित PCR पद्धती या उत्परिवर्तनांवर प्रभावीपणे लक्ष ठेवू शकतात (हाजियान इत्यादी, २०१९). यामुळे आरोग्यसेवा प्रदात्यांना TNBC रुग्णांमधील विशिष्ट उत्परिवर्तनांविषयी संबंधित माहिती देखील मिळू शकते, ज्यामुळे त्यांच्या उपचारांची दिशा सुधारण्यास मदत होऊ शकते. तथापि, या एकत्रित तंत्राला मर्यादा आहेत. त्यामुळे, TNBC च्या निदानासाठी आरोग्यसेवेत ही CRISPR/Cas-PCR पद्धत वापरण्यापूर्वी व्यापक संशोधन प्रयत्नांची आवश्यकता आहे (यांग इत्यादी, २०१९).
पोस्ट करण्याची वेळ: ऑक्टोबर-१४-२०२४